Poner a punto una metodología rápida y eficaz para el diagnóstico molecular del síndrome X frágil (SXF), mediante técnicas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) del triplete CGG, y establecer así un protocolo que nos sirva para: a) descartar el síndrome en pacientes con retraso mental no clasificado; b)averiguar el genotipo exacto de los individuos afectados; c)estudiar todos los individuos en riesgo de las familias con síndrome X frágil y encontrar los portadores asintomáticos, y d) proporcionar así el adecuado asesoramiento genético y reproductor a las familias en las que se transmita el síndrome.

Se estudiaron 438 muestras de individuos de 50 familias con síndrome X frágil. Se utilizaron tres protocolos de PCR, uno para detección con bromuro de etidio y luz ultravioleta; el segundo para detección con digoxigenina y el sustrato quimioluminiscente (CSPD), trasblotting e hibridación con la oligosonda (CGG)5; el tercero para amplificar y detectar de forma parecida el microsatélite DXS 548.

Se encontraron 121 individuos con la mutación completa (60 varones y 61 mujeres); 86 premutados (7 varones y 79 mujeres); 16 mosaicos y 215 normales. La PCR ampli-ficó hasta 120-150 repeticiones, y fue necesario el estudio directo con sonda en el caso de ausencia de banda o banda única en mujeres. La PCR resultó más precisa que el Southern-blot de ADN genómico en los portadores premutados. Finalmente, se halló en una familia recombinación entre el locusFRAXA y el microsatélite DXS 548.

Estos protocolos de PCR no radiactiva permiten el diag-nóstico rápido y seguro del síndrome X frágil, y están especialmente indicados en posibles portadoras y para establecer el diagnóstico prenatal.

The aim of this study was to develop a rapid, non-radioactive and effective method for the molecular diagnosis of fragile X syndrome (FXS) by the polymerase chain reaction (PCR) of the CGG repeat and to establish a protocol to be used in: a)ruling out FXS in patients with non-specific mental retardation; b) determining the exact genotype of affected individuals; c)studying all at-risk individuals from families with FXS and identifying asymptomatic carriers, and d) offering accurate genetic and reproductive counselling to families with FXS.

Samples from 438 individuals from 50 families with FXS were studied using three different PCR tests: the first to detect ethidium bromide through ultraviolet light, the second to detect digoxigenin and CSPD after blotting and hybridisation with the (CGG)5 oligoprobe, and the third to amplify and detect the DXS 548 microsatellite.

Of the 438 individuals studied, 121 had full mutations (60 males and 61 females), 86 had pre-mutations (7 males and 79 females), 16 showed mosaic patterns and 215 had no mutations. PCR techniques amplified up to 120-150 repeats, and direct study with probes was required when no bands or only one band was detected in females. PCR was more accurate than genomic DNA Southern blot analysis in pre-mutated carriers. In one family, recombination between the FRAXA locus and the DXS 548 microsatellite was found.

These non-radioactive PCR protocols permit rapid and accurate diagnosis of FXS. They and are especially useful in prenatal diagnosis and in the identification of carriers.