Determinar, mediante crematocrito, las modificaciones del contenido graso de la leche materna cruda y pasteurizada a lo largo de 3 meses de congelación.
MétodoSe analizó la evolución del crematocrito (fórmula de Lucas) en leche cruda y pasteurizada a lo largo de 3 meses de congelación a −20°C.
ResultadosLa grasa en leche cruda (n=44) fue 3,19g/dl al inicio y 2,86g/dl a los 3meses de congelación (p=0,02). En leche pasteurizada (n=36), al inicio fue 2,59g/dl y 2,20g/dl al mes de congelación (p=0,01), posteriormente, hasta los 3 meses, no hubo cambios significativos. Se observó variabilidad en los valores intermedios.
ConclusionesSe observó una disminución en la medida de la grasa tras congelación en leche cruda y pasteurizada. La congelación no impide la acción de la lipasa y también afecta al glóbulo de grasa. Probablemente, el crematocrito no sea el método óptimo para cuantificar la grasa en leche ya procesada.
To determine, by the creamatocrit measurement, the effect on the fat content of raw and pasteurized donor milk of freezing during 3 months at −20 °C.
MethodsThe evolution of the creamatocrit measurement (following Lucas technique) on frozen (−20 °C), raw and pasteurized human milk, was analyzed during 3 months.
ResultsThe fat content of raw milk (n=44) was 3.19 g/dl at the beginning and 2.86 g/dl after 3 months frozen (p=0.02). In pasteurized milk (n=36) fat content at the first determination was 2.59 g/dl and 2.20 g/dl after 1 month frozen (p=0.01). Afterwards there were no significant changes up to 3 months frozen. Variability was observed in the intermediate values.
ConclusionsA reduction on the fat content measurement of raw and pasteurized donor human milk after freezing was observed. Freezing does not inactivate the milk lipase but does destroy the fat globule. Creamatocrit measurement may not be the best method to determine the fat content of processed human milk.
La leche materna es el alimento ideal para los recién nacidos, especialmente si son prematuros o están enfermos1–4, pero sus propiedades pueden alterarse durante su manipulación y almacenaje.
La congelación de la leche materna a –20°C garantiza su calidad microbiológica pero los efectos en la calidad nutricional han sido poco investigados. Existen estudios que han observado una disminución en la capacidad bactericida y antioxidante de la leche materna5–7 y una reducción en la medida del contenido calórico y graso con el tiempo de congelación8.
En ocasiones, el contenido nutricional de la leche materna no es suficiente para alcanzar las necesidades de los recién nacidos prematuros y/o de bajo peso9, por ello es importante conocer su valor nutritivo. Los lípidos representan la principal fuente de energía, pero es el componente que mayores variaciones presenta10. El crematocrito es un método sencillo y barato para calcular el contenido lipídico y calórico de la leche materna. Fue descrito por Lucas et al.11 en 1978. Varios autores han encontrado una buena correlación entre el valor calórico de la leche y el crematocrito12–14.
El objetivo de nuestro estudio fue determinar, mediante el uso del crematocrito, las modificaciones del contenido graso de la leche materna cruda y pasteurizada a lo largo de 3 meses de congelación a −20°C.
Material y métodosEstudio experimental. Las muestras las proporcionaron las mujeres donantes del Banco de Leche, previo consentimiento informado. Fueron extraídas manualmente o con sacaleches y se almacenaron en botes de cristal esterilizados.
Las muestras de leche cruda (no pasteurizada) se refrigeraron a 4-5°C tras la extracción durante un máximo de 24 h. En esas primeras 24 h, las muestras se homogeneizaron mediante 10 balanceos en forma de arco y se dividieron en 7 alícuotas. Se realizó el primer análisis (tiempo 0) y las 6 alícuotas restantes se congelaron a −20°C.
Las muestras de leche pasteurizada, inmediatamente después de la pasteurización Holder, se homogeneizaron mediante 10 balanceos en forma de arco y se dividieron en 7 alícuotas. Se realizó el primer análisis tras la pasteurización y las 6 alícuotas restantes se congelaron a −20°C.
Las alícuotas, tanto de la leche cruda como de la pasteurizada, se almacenaron en tubos de polipropileno y se identificaron en base al tiempo de congelación (7, 14, 21, 30, 60 o 90 días).
Para ser analizadas las alícuotas, se descongelaron al baño maría a 40°C hasta que quedase un bloque central congelado y posteriormente en el frigorífico a 4–5°C.
Análisis del crematocritoSe reprodujo la técnica de Lucas11. Se calentó cada alícuota al baño maría a 40°C durante 10 min y se homogeneizó con un agitador tipo Vortex®. De cada alícuota se extrajeron para realizar el crematocrito 3 capilares de 75 μl, sellados en un extremo y se centrifugaron durante 15 min a 12.000rpm en una centrífuga Hettich® para hematocrito.
Se midieron, con una regla milimetrada, las columnas de crema y suero. El crematocrito se expresó como el porcentaje de crema con respecto a la longitud total de la columna. Se calculó la media de los 3 crematocritos y, mediante la fórmula de Lucas, el contenido graso (%crema-0,59)/0,146=g/l y energético (% crema×66,8×290=Kcal/l).
Métodos estadísticosTamaño muestral: se realizó un estudio piloto previo. La diferencia en el contenido graso que se encontró fue de 0,7g en leche cruda y 0,5g en leche pasteurizada. El tamaño muestral requerido para detectar esa diferencia, con un poder del 80% y un nivel de confianza del 95%, fue de 39 muestras de leche cruda y 34 de leche pasteurizada.
Para la descripción de las variables continuas, se empleó la media ± desviación estándar. La proporción de muestras estudiadas con 1,2 o 3 crematocritos se expresó mediante porcentajes. Para evaluar las diferencias en el contenido graso y calórico entre el momento inicial y los diferentes tiempos de congelación, se utilizó el test estadístico t de Student para datos pareados. Se comprobó la normalidad de la distribución de los datos con el test de Kolmogorov-Smirnov.
ResultadosSe recogieron 44 muestras de leche donada cruda. En la tabla 1 se muestran el número y porcentaje de alícuotas de leche cruda en las que se realizaron 1, 2 o 3 crematocritos.
Número y porcentaje de alícuotas de leche cruda en las que se realizaron 1, 2 o 3 análisis del crematocrito en cada momento de estudio
| Inicio (N=44) | 7 días (N=44) | 14 días (N=44) | 21 días (N=44) | 30 días (N=44) | 60 días (N=44) | 90 días (N=44) | |
| 1 análisis | 3 (6,82%) | 4 (9,09%) | 0 | 2 (4,55%) | 0 | 5 (11,36%) | 3 (6,82%) |
| 2 análisis | 11 (25%) | 13 (29,55%) | 11 (25%) | 12 (27,27%) | 13 (29,55%) | 4 (9,09%) | 14 (31,82%) |
| 3 análisis | 30 (68,18%) | 27 (61,36%) | 33 (75%) | 30 (68,18%) | 31 (70,45%) | 35 (79,55%) | 27 (61,36%) |
La media ± desviación estándar del contenido graso al inicio fue de 3,19 ± 1,44g/dl y del contenido energético de 640,05 ± 140,60kcal/l. Se observó una reducción significativa de la medida del contenido graso y energético tras la congelación a –20°C en todos los momentos del análisis (7, 14, 21, 30, 60 y 90 días) (tabla 2).
Comparación del contenido de grasa y contenido calórico en leche cruda (N=44) según el tiempo de congelación a –20°C
| Inicio | 7 días | 14 días | 21 días | 30 días | 60 días | 90 días | |
| Grasa (g/dl) | 3,19 ± 1,44 | 2,75 ± 1,31p<0,001 | 2,92 ± 1,29p=0,040 | 2,81 ± 1,47p=0,011 | 2,72 ± 1,29p<0,001 | 2,72 ± 1,49p=0,003 | 2,82 ± 1,62p=0,020 |
| Contenido calórico (Kcal/l) | 640,05 ± 140,60 | 597,32 ± 127,40p<0,001 | 613,74 ± 125,80p=0,040 | 603,52 ± 143,44p=0,011 | 594,47 ± 126,16p<0,001 | 595,04 ± 145,45p=0,003 | 604,39 ± 157,61p=0,020 |
Se muestran la media±desviación estándar y el análisis con t de Student pareado.
Se recogieron 36 muestras de leche donada pasteurizada. En la tabla 3 se muestran las alícuotas en las que se realizaron 1, 2 o 3 crematocritos.
Número y porcentaje de alícuotas de leche pasteurizada en las que se realizaron 1, 2 o 3 análisis del crematocrito en cada momento de estudio
| Inicio (N=36) | 7 días (N=36) | 14 días (N=36) | 21 días (N=36) | 30 días (N=36) | 60 días (N=36) | 90 días (N=36) | |
| 1 análisis | 2 (5,56%) | 1 (2,78%) | 1 (2,78%) | 0 | 0 | 4 (11,11%) | 2 (5,56%) |
| 2 análisis | 3 (8,33%) | 2 (5,56%) | 3 (8,33%) | 3 (8,33%) | 5 (13,89%) | 2 (5,56%) | 14 (38,89%) |
| 3 análisis | 31 (86,11%) | 33 (91,67%) | 32 (88,89%) | 33 (91,67%) | 31 (86,11%) | 30 (83.33%) | 20 (55,56%) |
La media del contenido graso al inicio del estudio fue de 2,59 ± 1,17g/dl y del contenido energético fue de 581,56 ± 114,04 Kcal/l. Se observó una reducción significativa de la media del contenido graso y energético tras la congelación a –20° durante el primer mes de estudio (7, 14, 21 y 30 días) (tabla 4).
Comparación del contenido de grasa y contenido calórico en leche pasteurizada (N=36) según el tiempo de congelación a –20°C
| Inicio | 7 días | 14 días | 21 días | 30 días | 60 días | 90 días | |
| Grasa (g/dl) | 2,59 ± 1,17 | 2,18 ± 1,04p=0,015 | 2,00 ± 1,09p<0,001 | 1,95 ± 1,03p<0,001 | 2,20 ± 0,96p=0,010 | 2,59 ± 1,68p=0,996 | 2,76 ± 2,09p=0,580 |
| Contenido calórico (Kcal/L) | 581,56 ± 114,04 | 541,96 ± 101,79p=0,015 | 524,11 ± 106,48p<0,001 | 520,03 ± 100,78p<0,001 | 543,71 ± 93,53p=0,010 | 581,69 ± 163,83p=0,996 | 598,40 ± 204,01p=0,580 |
Se muestran la media±desviación estándar y el análisis con t de Student pareado.
Nuestro estudio muestra una disminución del contenido graso y calórico medido por el crematocrito en leche materna cruda y pasteurizada tras la congelación a –20°C. Esta reducción fue significativa durante los 3 meses de estudio en leche cruda y solo hasta el primer mes en leche pasteurizada. Ningún estudio previo ha evaluado el cambio del crematocrito, tanto en leche cruda como pasteurizada a lo largo de 3 meses de congelación.
Existen varios trabajos que describen un aumento de la actividad de la lipasa de la leche durante la congelación a –20°C15–17. La lipólisis produce hidrólisis de los triglicéridos, de tal forma que aumentan los ácidos grasos libres en la leche y se reduce la columna de crema. Esto justificaría los hallazgos en relación con la disminución del contenido graso y calórico medido por crematocrito en la leche cruda desde el inicio hasta los 3 meses de congelación. En nuestro estudio, se ha visto también que la reducción en la medida del contenido de grasa en leche pasteurizada solo ocurre durante el primer mes. Se ha descrito que la pasteurización disminuye la actividad de las lipasas18; la menor hidrólisis de triglicéridos podría explicar que la reducción de la columna de crema sea menor en la leche pasteurizada que en la cruda.
Por lo tanto, aunque probablemente durante la congelación el contenido total de grasa no varía, surgen cambios en el glóbulo de grasa que alteran la medida del crematocrito. Lucas et al.11 ya describieron que esta rotura del glóbulo de grasa podría provocar una falsa disminución del crematocrito, aunque en su estudio no observaron cambios significativos en el crematocrito tras la congelación durante 2 meses. Por el contrario, otros autores14 describieron una disminución del crematocrito tras 7 días de congelación a −20°C; en este estudio, la correlación entre el crematocrito y el contenido lipídico y calórico seguía siendo alta pero planteaban la necesidad de crear otra ecuación para calcular con más exactitud el contenido energético en la leche congelada.
Los valores intermedios que se muestran en nuestro estudio, tanto en leche cruda como en leche pasteurizada, no se explican fácilmente y ponen de manifiesto las limitaciones del crematocrito para medir la grasa en leche que ya ha sido procesada.
La principal limitación de este trabajo es que, por problemas técnicos, no se consiguió medir en todos los casos el crematocrito por triplicado, como indica la técnica de Lucas11, aunque otros estudios han utilizado el crematocrito por duplicado con buenos resultados19,20.
Por todo lo comentado anteriormente, consideramos que el crematocrito, aunque es un método de fácil disponibilidad en las unidades neonatales, no es un método óptimo para medir el contenido graso en leche que ha sido previamente procesada. Una opción sería modificar la ecuación de Lucas11 cuando se utilice en leche congelada o pasteurizada o bien utilizar otros métodos de medida más válidos.
Conflicto de interesesLos autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.
Presentación previa: enviado como comunicación para miembro numerario en el XXIV Congreso de Neonatología y Medicina Perinatal, previsto para octubre del 2013 en Barcelona.
